方案优势

别利用近红外光谱法、高 效液相色谱法以及聚合酶链式反应等结合化学测定方法或质谱法可以定性定量检测牛乳中的大豆蛋白，但是检测成本较高。本实验使用氨基酸分析仪，利用牛乳和大豆蛋白质的氨基酸组成含量差异对牛乳中掺入的大豆蛋白进行定性定量检测，弥补了现有方法耗时长检测不灵敏的不足。

采用标准

相关标准

方法/原理/步骤

　　牛乳样品前处理

　　5种鲜牛乳在4℃条件下，5 000 r／min离一1：,30 min，去除上层脂肪得到脱脂牛乳，编号为鲜牛乳1～5。

　　蛋白质含量的测定

　　凯氏定氮法分别测脱脂后的5种鲜牛乳和3种大豆分离蛋白的蛋白质含量。

　　模拟掺假实验

　　取牛乳1分别添加10%, 5%, 2%, 1%, 0%的大豆分离蛋白S1(每个掺假样品的蛋白质含量保持一致)，将以上样品经均质仪反复均质3次，再经涡轮搅拌过夜备用。掺假牛乳2-5处理方法同掺假牛乳。

　　样品处理

　　取2.5 mL液体样品(0.100 g固体样品)于水解管中加10 mL 6 mol/L盐酸滴入正辛醇充氮后封管置于110℃烘箱中保持24 h，冷却后经滤纸过滤到50 mL容量瓶中用超纯水反复冲洗水解管及滤纸最后定容。取1 mL的样液于蒸发皿中在蒸气浴上蒸干，然后加0.02 mol几盐酸2.5 mL溶解用针管过滤器过滤，备用上机。

　　色谱条件

　　荧光激发波长338 nm;荧光发射波长425 nm;柱温62 0C;反应器35 0C;进样量10匹;流速0.4 mL/min;柱后泵流速0.4 mL/min;流动相配制见表1，梯度洗脱程序见表2。

仪器设备

　　L-8800型氨基酸分析仪及数据处理平台；

　　KQ-250B型超声波清洗器；

　　凯氏定氮装置、高速冷冻离心机；

　　均质仪。