检测认证人脉交流通讯录
- 一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物链霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗链霉素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物链霉素的含量。
二、试剂盒特性
试剂盒灵敏度： 0.5ppb
样本检测下限
鸡肉、鸡肝、牛奶—————————————20ppb
蜂 蜜/蜂王浆— —— — —— — —— —————10ppb
交叉反应率
链霉素 — — —— —— — — — — —— — — 100%
双氢链霉素 ——————— —— — — —— —108%
卡拉霉素 —— — — — — — — — — — — — — < 1%
庆大霉素 — — —— — — — — — — — —— — < 1%
回收率
牛 奶— —— —— —— —— —— —— —95±15%
鸡肉组织— —— —— —— —— —— —— —85±10%
蜂蜜/蜂王浆 — —— —— —— —— —— —75±15%
三、试剂盒组成
1、 微量测试孔：每条8孔，一板12条
2、 标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶标记物 7ml ……………… 红色帽
4、 抗体工作液 7ml ……………… 蓝色帽
5、 底物液 A液 7ml ……………… 白色帽
6、 底物液 B液 7ml ……………… 黑色帽
7、 终止液 7ml ……………… 黄色帽
8、20×浓缩洗涤液 40ml ……………… 白明帽
9、10×浓缩复溶液 50ml ……………… 透明帽
四、所用仪器、试剂
具备的仪器：微孔板、酶标仪、匀质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：单道 20ul～200ul、100ul～1000ul多道 250 ul
试 剂：浓磷酸、氢氧化钠、Na2HPO4•12H2O、NaH2PO4•2H2O、正己烷
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制：
配液1、将浓缩复溶液用去离子水按1：9稀释（1份浓缩复溶液+9份去离子水）。
配液2、0.05M PB溶液
13.0gNa2HPO4•12H2O+2.2gNaH2PO4•2H2O加去离子水定溶至1L。
配液3、0.04M磷酸溶液
1ml浓磷酸加去离子水定溶至360ml。
配液4、1M NaOH溶液
称取4g NaOH加去离子水定溶至100ml。
（a）牛奶样本的处理方法
1、 取牛奶1ml，按1:39稀释，混合30s。（50 ul牛奶+1950 ul稀释后的复溶液）
2、 取50ul用于分析。
稀释倍数：40
（b）鸡肉、鸡肝样本的处理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的匀浆样本与8ml 0.05MPB缓冲液混合5min，置56℃水浴环境放置30min；
2、 室温4000r/min以上，离心10min；
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷，充分混匀，室温4000r/min以上，离心5min
4、 去上层液体取50ul下层液，加入450ul 稀释后的复溶液混匀，混合30s；
5、 取50ul用于分析。
样本稀释倍数：40
（c）蜂蜜、蜂王浆：
1、 称量2±0.05g 样本加入4ml 0.04M磷酸，振荡至完全溶解，
2、 室温4000r/min以上，离心5min，直至清亮。（蜂蜜样本可不用离心直接进行第3步）
3、 加入450ul 1M NaOH将PH值调至7-9之间.(蜂王浆样本需将全部上清移至另一干净离心管中调节PH值至7-9之间)
4、 室温4000r/min以上，离心5min ，直至清亮。
5、 取50ul上清液，加入450ul稀释后的复溶液混匀，混合30s；
6、 取50ul用于分析。
稀释倍数：20 检测下限：10ppb
六、 酶标免疫分析程序:
测定前应须知：
1、 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2、 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。
操作步骤：
1、 从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、 加标准品/样本50µl /孔，然后加酶标记物50μl/孔，再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，37℃环境反应40min。
6、 取出用洗涤液按每孔250ul，洗板4－5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7、 显色：每孔加入底物A液50ul，再加底物B液50ul，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色20min。
8、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定每孔OD值。
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