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笃玛 兔抑瘤素M(OSM) ELISA 试剂盒 产品价格
- 笃玛 兔抑瘤素M(OSM) ELISA 试剂盒 产品价格
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍(48T的20倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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常用标签包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目标蛋白;其纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。
His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白的吸附纯化。由于分子量小,且较容易分离和纯化,是目前使用最广泛的一种。
GST标签体系具有蛋白表达率高,表达产物纯化方便,利于GST抗体制备的特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。
GFP或其突变体EGFP等广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分别。GFP抗体不经可以检测GFP或其适当的突变体,也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。
Myc标签(序列为:EQKLISEEDL)已成功应用于WB杂交技术、免疫沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。Myc重组蛋白质可通过偶联Myc标签抗体到活化的琼脂糖上而进行亲和纯化。但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力,因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。
HA标签系统利用一个HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签抗体也被广泛运用。
MBP标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。
其余标签抗体还有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但应用相对较少。
笃玛 兔抑瘤素M(OSM) ELISA 试剂盒 产品价格
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。