检测认证人脉交流通讯录
- 1.名称:TMB底物液,单组份底物液,ELISA 底物显色液。
2. 产品描述:
用于HRP标记的ELISA;单一组分,稳定,使用方便,灵敏度高。主要成分是3,3’,5,5’–四甲基联苯胺[3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine(TMB)],是辣根过氧化物酶(HRP)的底物,在辣根过氧化物酶的作用下,发生氧化剂反应生成蓝色产物。颜色的强弱与HRP的活性呈正比,从而可以用于基于HRP标记物的检测。
规格: 10mL, 1000mL, 5000mL
3.保存及运输:
常温运输(勿超过30℃),2-8℃储存12个月。
4.使用方法:
根据计划使用的数量,将该次需要的TMB显色液从大瓶转移的干净的避光小瓶中。后续从小瓶中取用
1)加液:加完HRP结合物并温育一定时间后,洗板3-5次,每孔加TMB显色液100μL - 200μL。
2)根据个人实验需要,在室温(15-25℃)或37°C下温育10-30分钟。
3)终止:加50微升的2M盐酸或硫酸溶液终止反应,孔中反应液由蓝色变为黄色。
4)读数:终止反应后30分钟内在450nm处读数。
如果出现高的反应背景或沉淀,表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀,可在终止后马上读数;或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物
5.注意事项:
1)适用于HRP标记的ELISA实验,该底物中含TMB和过氧化氢,在HRP的作用下,被氧化形成水溶性蓝色产物,在370nm和650nm有吸收峰。进行动力学实验时,可直接检测650 nm的吸光度。由于蓝色会不断加深,推荐及时加入终止液,加入酸性终止液后溶液变成稳定的黄色,检测波长为450 nm,吸光度值可较不终止增加数倍且保持稳定。
2)该底物对微量的HRP酶敏感,在使用过程中应避免污染,切忌将枪头直接插入大瓶中取液。一旦未使用的显色液变蓝了,说明试剂遭到污染,需停止使用。
3)操作过程中避免阳光的直射,分装的容器建议用塑料容器,避免使用金属容器以及细菌和氧化还原剂污染的容器。
4)大量分装时最好使用称重的方法或蠕动泵。
5)过高浓度的HRP会导致TMB呈现绿色或红色,或终止后出现沉淀,应该减少抗体和标记物的用量或缩短孵育时间。
6)本品的灵敏度和信号水平可能优于客户目前正在使用的显色液,为了减少阴阳性的误判,需调整阴阳性的判断标准以避免错判。