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- 色谱柱的发展,经历了从不定型硅胶到高纯球型硅胶、从低pH条件下不稳定到稳定的过程。但硅胶在高pH条件下极度不稳定的问题,始终没有很好的解决方案,直到杂化颗粒的诞生。杂化颗粒集合了有机和无机填料的优点,既具有纯硅胶填料的高柱效、高机械强度及保留稳定性能,又具有聚合物填料的宽pH范围稳定性和抑制硅醇基的酸性的特性,使其在碱性流动相中也能游刃有余。
与传统硅胶颗粒色谱柱相比,杂化颗粒色谱柱具有耐受碱性流动相的特点。传统C18硅胶颗粒色谱柱推荐的流动相pH为8,这是因为在高pH条件下,硅胶填料开始溶解,键合相也会水解(反应机理为:在碱性条件下,OH-亲核进攻硅胶基质,发生亲核取代反应,导致硅胶溶解及键合相的水解),导致柱效下降。而杂化颗粒因嵌入硅甲基,亲核取代反应放缓,颗粒表面溶解速度明显放缓,所以色谱柱寿命大大延长。
传统的C18硅胶色谱柱在分析碱性化合物时,峰形有时候会很糟糕,这是因为硅醇基与碱性化合物存在离子交换作用,导致拖尾,虽然一些色谱柱采用封端这一方法来改善拖尾,但是封端不可能*进行,还是会有残留硅醇基,拖尾在所难免。而杂化颗粒在合成之时就引入硅甲基,从根源上减少了硅醇基,所以杂化颗粒酸性的降低使其在宽pH范围内为碱性化合物带来了对称的峰形。在方法开发的流动相pH优化阶段,杂化颗粒色谱柱可为不同pKa值酸性和碱性的混合分析物的分离提供了更宽的选择面。
当缓冲盐流动相的pH由3.75提高到10.0时,杂化颗粒色谱柱可以使一些碱性分析物的柱容量提高20倍或更高。在低pH条件时,碱性分析物处于质子化的状态,离子间的相互排斥影响其与固定相的吸附,所以对碱性分析物来说,柱容量有限。而本产品由于可以使用碱性流动相,由此可以提高柱容量,这对碱性分析物的色谱制备具有重大意义。
杂化颗粒色谱柱
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