检测认证人脉交流通讯录
- SILAC代谢标记定量实验服务的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6个倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合,经分离、纯化后进行质谱鉴定,根据一级质谱图中两个同位 素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体内代谢标记法。
实验操作流程:
1、蛋白提取和样品制备
2、标记效率测试
3、样品混台
4、SDS-PAGE分级
5、酶解
6、质谱鉴定
7、软件分析
8、定性定量蛋白质组结果
9、生物信息学数据挖掘和统计分析
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