检测认证人脉交流通讯录
- PKC活性操作步骤:
1.用预冷的匀浆器把细胞匀浆。
2.在4°C，用14,000 xg离心裂解液5分钟，保存上清。
3.用PKC抽提液预平衡1ml的DEAE纤维素柱，再把第2步中得到的上清过柱。用5m的PKC抽提液洗柱子，然后用5ml含有200mM NaCI的PKC抽提液洗脱含有PKC的组分。
4.用PKC稀释液(PKC dilution buffer)将少量蛋白激酶C (Promtein Kinase C)稀释到2 .5ug/ml.随试剂盒所附的产品信息中标有这个酶的初始浓度。
5.用探头超声波破碎仪超声处理PKC Activator Solution 20-30秒,或直到溶液变温暖。
6.对每一个样品，按照下面所列顺序在0.5ml小离心管中混合PepTag@ PKC 5x Buffer,PepTag@ C1Peptide,超声过的PKC Activator 5X Solution,和水。在样品加入之前，小离心管--直要放在冰上。阴性对照将用于对反应进行定量时确定其摩尔吸收值(说明书第IV部分) 。
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