广州微平科技服务有限公司

激光共聚焦显微镜

内容简介

Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔上，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点，被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面连续的光切图像 。

 

结果展示

 

I:面筋提取物颗粒染色拍照；II：乳胶颗粒染色拍照；III：生物膜细菌的死活分布3D图；IV:细胞死活染色拍照；V：细胞内线粒体定位；VI: 鬼笔环肽细胞骨架染色；VII: 组织免疫荧光（组织内蛋白定位）；VIII:细胞内荧光探针成像；IX：细胞免疫荧光。

 

 

服务说明

送样方式：

可接收自行处理好后用于直接拍摄的样品，由我们提供拍摄服务；也可以委托平台做前处理，如需前处理请客户务必于送样单内附上详尽的实验方案和处理步骤；实验所需的细胞和试剂等可自行提供，也可以委托平台代购。

需要您提供

1.可直接用于拍摄的片子（直接上机拍摄）

或者2.实验所需的样品（含前处理方案+制片方法）

 

服务周期：

一般为样品接收后的2-3周，具体实验周期及送样时间请与客服沟通确认，谢谢！

 

收费说明：

项目	价格
前处理费用	依据具体实施方案议价
2D模式拍摄	300元/样起
3D模式拍摄	300元/样起
试剂费用	依据实际订购价格

最终收费以与工作人员沟通确定的价格为准。

 

交付内容：

2D模式每样拍摄5-6个视野，3D模式每样拍摄2-3个视野，结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给工作人员。

 

服务简介

激光扫描共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope，简称CLSM）是近代生物医学图象仪器。它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针。利用计算机进行图象处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象，以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。

利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔上，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点，被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面连续的光切图像。

 

样品要求

1,细胞爬片、石蜡切片、冰冻切片等可用于激光共聚焦的样本。

2,原样可是固体原样，也可以分散后的样品，质量10-50mg。
3,测试的具体要求信息。

 

检测项目

可以直接现场进行拍摄，也可以做委托测试

现场测试机时预约

平台负责机时预约，客户携带样品前去实验室自主测试。

样品委托测试

客户提供样品，平台负责预约机时并安排技术老师去测试，之后发送结果给客户。

样品制样

客户不清楚如何制样时，平台可提供制样服务，部分载样工具需收取一定材料费。

 

 

生物扫描电镜（SEM）

内容简介

生物SEM介绍

生物扫描电镜主要利用二次电子成像拍摄材料的表面三维形貌情况，拍摄照片为黑白照片；一般用来观察细胞外表面的变形以及受损情况等，也可以观察材料在细胞表面的分布情况，广泛应用于检测生物样品、非均相有机材料、无机材料等微米、纳米范围内的表面特征。

服务说明

送样方式：

可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单

①需要您提供的样品：收集细胞/组织取样（新鲜迅速取材），置于1.5ml离心管内，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4℃过夜，请不要倒弃固定液，一般固定12h后可寄送。

②打印填写完整的送样单和样品一起寄送。

样品取材及固定常用方法

细胞类	106以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。
组织类	新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，然后放入4°C冰箱过夜。
细菌类	吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，齐上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。
*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置
*如样品取材及固定有疑问请及时与 工作人员沟通

 

服务周期：

一般为样品接收后的2-3周，具体实验周期及送样时间请与工作人员沟通确认，谢谢！

 

收费说明：

扫描电镜全套服务（制片+拍摄）  500元/样起。

最终收费以与 工作人员沟通确定的价格为准。

 

交付内容：

每样提供8-10张拍摄图片，结果反馈请在测试完成一周内，不建议回收样品，如有需要请提前反馈给工作人员。

服务参数

1． 样品预处理装置

1.1组合式液氮泥预冷制备装置，过冷液氮温度为-210℃

1.2带有样品托装载机构，可方便对接经高压冷冻处理或野外预冷样品的

2．冷冻制备系统冷源

冷冻制备腔室和扫描电镜冷台、冷阱均采用过冷氮气气冷方式， 制备腔室冷台和电镜冷台在10分钟内可从室温降至-140℃以下，控温精确；配置分体式安装的21升液氮杜瓦瓶组件，无需补充液氮持续续运行时间长达20小时

3．高真空冷冻制备装置

3.1真空系统

涡轮分子泵抽气系统，制备腔室真空度优于10-6 mbar量级（液氮冷却时）；分子泵配有阻尼隔振装置，60%以上的系统运行时间内前级旋转机械泵无需工作

3.2 制备腔室冷台和冷阱

冷冻制备腔室通过接口与电镜腔室直接相连，方便样品在冷冻制备腔室与电镜冷台之间的来回传输，具有重做样品的能力

冷台：温度范围为-190℃ ～ +100℃；温度稳定度为1℃

冷阱：冷台附近设有防污染冷阱，冷阱温度可低至-190℃

3.3 样品传输通道采用门阀密封，无需润滑脂

3.4标配断裂操纵器冷刀组件断裂装置，可选高度可调的冷刀组件；可设置及贮存时间-温度的升华参数曲线，全自动升华操作；溅射镀膜头为低电压冷溅射工作方式，标配Pt靶，可选其它靶材，全自动溅射镀膜操作

4．样品传输装置

4.1结构小巧，易操作

4.2密封方式：采用真空（压差）及机械拧紧机构双重密封

5．扫描电镜冷台及冷阱

5.1扫描电镜冷台和冷阱

冷台：-190℃ ～ +100℃；温度稳定度为1℃

冷阱：-190℃或更低

冷台和冷阱采用独立的双气路冷却

5.2电镜腔室配有CCD相机及LED照明，可在触摸屏上显示电镜腔室内部样品及样品台图像

6．触摸屏控制

允许用户自定义方案，可快速输入和储存方案以便随时访问调用，可实现自动溅射及自动升华刻蚀的功能，并且具有屏幕帮助及操作提示功能。通过CCD相机，屏幕可显示制备腔室和扫描电镜腔室内部的图像

 

服务简介

功能：普通扫描电镜服务及冷冻扫描电镜服务。

扫描电镜冷冻传输系统与场发射扫描电镜相结合，通过升华、断裂等方法可直接在含水状态下观察样品形貌，且无皱缩变形、可溶成分也被保留，是不失真观察生物样品精细结构的最有效方法。

特点：该系统可与当今主流的场发射扫描电镜相结合，具有操作简便、形貌保真的特点。

 

检测项目

适用于液体、半液体、生命材料及其它对各种干燥敏感的样品（如溶胶、高分子材料等）的制备。

 

 

生物透射电镜（TEM）

内容简介

生物TEM介绍

生物透射电镜是观察和研究超微结构的重要工具，可用于观察细胞整体结构、亚细胞结构。生物细胞样品内部形态观察建议用专门应用于生物样品观察的透射电镜，其电压在80-120kv可以降低生物样品因高能电子束辐射而损伤的影响，同时依赖于生物样品制备技术的发展，如超薄切片技术、负染色技术、冷冻制样技术、细胞化学技术等，广泛应用于组织学、细胞学、病毒学、病理学及材料学等多个学科的研究中，如常用来观察细胞整体结构、细胞膜细胞壁细胞器的变化、材料进入细胞内部的分布情况、细胞应付外界刺激产生的自噬小体，以及外界生物入侵的侵染结构等等。

 

服务说明

送样方式：

可接收固定好的细胞/组织样品并附有详细送检要求的送样单

①需要您提供的样品：收集细胞/组织取样（新鲜迅速取材），置于1.5ml离心管内，加入2.5%的戊二醛溶液（固定液加满离心管，使样品完全浸没在固定液中），放置于4℃过夜，请不要倒弃固定液，一般固定12h后可寄送。

②打印填写完整的送样单和样品一起寄送。

样品取材及固定常用方法

细胞类	106以上的细胞，用细胞刮刀刮下来，1500-3000转离心，5-10min，收集细胞于1.5ml或2ml离心管，管底肉眼可见2-3粒大米状样品，如果细胞量很多，把细胞团块用细针尖挑成几个小团块，弃上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。
组织类	新鲜取材，取材位置准确，组织大小尽量在1-2mm³，离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中，固定液完全浸没组织，然后放入4°C冰箱过夜。
细菌类	吸取OD0.5-0.8的培养物，离心后弃培养基，收集菌体沉淀于管底黄豆大小，可以用PBS洗1-2次，齐上清，沿管壁缓慢加入4℃预冷的固定液，固定液完全浸没样品，然后放入4°C冰箱过夜。
*固定液的量请参考上图，加至箭头所示位置
*如样品取材及固定有疑问请及时与工作人员沟通

 

服务周期：

一般为样品接收后的3-4周，具体实验周期及送样时间请与工作人员沟通确认，谢谢！

 

交付内容：

每样提供8-10张拍摄图片，结果反馈请在测试完成一周内，如需回收剩余物料及切片，请提前备注清楚，样本回收默认测试完成一周后寄出，如需尽早回收样本，请及时反馈给工作人员。

服务简介

       以动物模型及体外培养细胞模型为研究对象，研究疾病的发生发展规律，从而阐明疾病本质的生物医学基础学科。超微病理学技术是研究疾病的病因、发生发展机制，以及其形态和功能变化等的重要手段之一。超微病理学技术主要分为标本制作和电镜分析。

 

样品要求

     标本类型主要有动植物组织器官、培养及脱落细胞、细菌、真菌、蓝藻等，均需进行以下制样过程。

1．固定 标本离体或离开原生活状态1分钟后立即投入4℃预冷的2.5％戊二醛缓冲电镜固定液中，取材时应绝对避免挤压、损伤，推荐大小为1mm3 或者截面积为1mm2的5mm长条随后送检。

2．标本制作  送检后标本需经过四氧化锇后固定、脱水、树脂半浸透、树脂全浸透、树脂包埋、高温聚合、超薄切片及染色。

 

透射电镜生物样品取材基本要求 

第一 取材准备   

1） 试剂   所需 2.5%戊二醛、0.1M PH7.35 的磷酸盐缓冲液，注明配制日期及启用日期，置于 4 摄氏度冰箱预冷（2.5%戊二醛预冷至少 1 小时以上；磷酸盐缓冲液不宜长时间预冷，容易结晶）。 

2） 仪器与器材   锋利刀片（手术刀片或飞鹰双面刀片）、镊子、低温操作台、1.5mlEP管、培养皿（或者硬纸卡，盛戊二醛用）、注射器（植物组织用）、冷冻离心机（细菌、细胞、藻类等需要离心的样品使用） 

2. 取材要求 

1） 快 

取材动作要迅速，材料离体后 1min 钟内必须进入戊二醛固定液，使组织、细胞尽可能保持原来生活状态，解剖器械要用锋利的刀片（新的手术刀片或飞鹰双面刀片）划切，避免牵拉或挤压，尽量减少取材中的机械损伤。（动物处死后 5min 内完成此步骤，时间越短越好！） 

2） 准

取材要准确 

①器官要准确； 

②部位要准确：如观察肾脏肾小球或脑神经元需取皮质而不要取髓质，观察胰岛尽量取胰尾。 

③胃肠道、皮肤、角膜、视网膜、耳蜗、骨骼肌等要注意方向性（横切或纵切），取材成条状（0.5mm×1mm×3mm），确保要观察的部位在较长的切面上。 

3） 冷 

取材过程应在 0~4 摄氏度的操作台上操作（或者是冰上操作，但要注意切勿使组织直接接触或贴近冰面，需要以操作面板隔离，以免操作时间过长而造成组织结冰出现冰晶损伤），所有器械、容器、2.5%戊二醛、PBS 需 4℃预冷足够长的时间。 

4） 小 

不定位组织大小为 1mm×1mm×1mm（尽可能小，可以更小为 0.5mm×0.5mm×1mm，越薄越好），如肝、肺、脾等不需要看特定结构的非定位器官组织；定位组织如神经、骨骼肌、肾、脑、肠、血管、胰岛等组织取材大小为 0.5mm×1mm×3mm的长条状（越薄越好）。 

 

第二  不同样本的取材方法

生物器官组织取材 

1. 浸入固定   麻醉（1%戊巴比妥钠铵 5ml/kg 体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官，用解剖刀（锋利刀片）取一小块组织，立即（越快越好，1~3min 完成此操作）放入盛有预冷 2.5%戊二醛的培养皿（或硬纸片上）中，随后立即沿小块组织边缘（已经被固定）用锋利刀片取 1mm×1mm×1mm 或 0.5mm×1mm×3mm 大小组织置于盛有预冷 2.5%戊二醛 1.5mlEP 管中继续固定，4℃保存（请勿靠近冰箱边上造成标本冷冻结冰！！！）。 

2. 灌注固定   脑组织等（初次取材者或未常规做灌注固定者此方法慎用，因在 TEM 结果出来前无法评价其固定是否成功）。 

 

培养细胞取材 

1. 贴壁细胞   培养好的细胞不经漂洗直接倒出培养液后迅速加足量预冷 2.5%戊二醛固定10min，随后用细胞铲或细胞刷成 45°钝角铲下细胞（勿用胰蛋白酶消化）后全部转移到15~50ml 离心管内，转速 800rpm 离心 5min，随后去除大部分上清液（留 1ml 左右），将离心管里的细胞轻轻吹散后转移到 1.5ml 的 EP 管内1000~1500rpm（尽量低转速，视不同细胞而言，建议先做一个转速梯 800、1000、1500rpm 度试验，找到最低可以离心成团的转速）离心 5~10min 成团（细胞团大小约半个至一个绿豆大小为宜）。离心完成后轻轻吸去上清液，管底的细胞团不要打散，沿管壁缓缓倒入适量的预冷 2.5%戊二醛，随后置于4℃冰箱固定。（此过程操作轻柔，切勿损伤细胞！） 

2. 悬浮细胞   直接将细胞培养液全部转移到 15~50ml 离心管内，转速 800rpm 离心 5min，随后去除大部分上清液（留 1ml 左右），将培养管里的细胞轻轻吹散后转移到 1.5ml 的 EP管内，1000~1500rpm（尽量低转速，视不同细胞而言，建议先做一个转速 800、1000、1500rpm 梯度试验，找到最低可以离心成团的转速）离心 5~10min 成团（细胞团大小约半个至一个绿豆大小为宜）。离心完成后轻轻吸去上清液，管底的细胞团不要打散，沿管壁缓缓倒入适量预冷 2.5%戊二醛，随后置于 4℃冰箱固定。（此过程操作轻柔，切勿损伤细胞！） 

3. 细菌悬液（固体培养基自行转移成悬浮液）   直接将细菌悬液全部转移到 15~50ml 离心管内，转速 800~1500rpm 离心 5min，随后去除大部分上清液（留 1ml 左右），将培养管里的细胞轻轻吹散后转移到 1.5ml 的 EP 管内，1500~3000rpm（视不同细菌而言，自行加大转速，建议不超过 5000rpm）离心 5~10min 成团（细胞团大小约半个至一个绿豆大小为宜）。离心完成后轻轻吸去出上清液，管底的细胞团不要打散，沿管壁缓缓倒入适量预冷 2.5%戊二醛，随后置于 4℃冰箱固定。（此过程操作轻柔，切勿损伤细菌！） 

 

植物组织取材 

    植物取材较容易，取一小块植物组织浸入盛有预冷 2.5%戊二醛培养皿（或硬纸卡）上，随后用锋利刀片切成 0.5mm×0.5mm×3mm 小长条薄片，随后抽取气体。  抽取气体   将植物组织同固定液一起倒入注射器，用乳胶手套食指堵住注射器出口，右手拉动针栓，将注射器口垂直向上，松开食指，右手轻推针栓使液面上的气泡从注射器口排出，反复多次，直至组织沉入固定液。 

 

 透射电镜生物样品运输基本要求 

用封口膜将 1.5mlEP 管管盖再次封好，做好标记，填好送样申请单（必须填，随样品寄出纸质版申请单）。随后插在海绵板或可以减震的塑料上，用废旧报纸包裹，放入 1~2 个冰袋，样品尽可能远离冰袋固定放置，以防样品出现冰晶损伤，寄出。 

 

检测项目

一．     样品包埋 送检后标本需经过四氧化锇后固定、脱水、树脂半浸透、树脂全浸透及树脂包埋后高温聚合。

二．     超薄切片 聚合后的组织树脂包埋块须在莱卡EM UC7超薄切片机下定位后，切下50-70nm薄片，随后用铜网捞片。

三．     铅铀染色 制作好的样品铜片经醋酸铀染色10min，后硝酸铅再染色10min，即可阅片

四．     拍照分析 按照客户拍照目的及拍照要求进行分析。