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蛋白印迹（Western blot）实验

 

内容简介

Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。如检测材料或者药物对某个信号通路上蛋白靶点的影响，检测对细胞内某个特定蛋白的表达量。首先通过凝胶电泳将不同分子量大小蛋白进行分离，后续利用特异性抗体识别一定分子量大小的目的蛋白。

 

结果展示

 

上图是通过Western blot检测细胞内蛋白的表达情况

 

服务说明

送样方式：

需要您提供1.    待测样品（材料或者样品处理后的细胞/蛋白，也可由我们代处理）。

            2.    提供待测样品的一抗及其说明书（一抗一般为5ul，也可由平台代购）。

            3.    其他所涉及的细胞、试剂盒以及生物耗材等平台都可以有偿提供。

 

服务周期：

具体按照实验要求，一般为接受样品后2-3周，具体实验周期请预约前与工作人员沟通确认，谢谢！

 

收费说明：

项目	收费
蛋白提取	50-100/样
检测费用	800/张膜
试剂费用	依据实际订购价格

 

交付内容：

实验报告、内参蛋白和目的蛋白曝光胶片各一张。

 

服务简介

Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白，经转膜、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体起反应，经过底物显色，分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况。该法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性，可以对目标蛋白进行定型和半定量的分析。

蛋白分子量测定

 

内容简介

蛋白分子量测定（2W以下的用MALDITOF/，2万以上的用SDS凝胶电泳）

SDS是十二烷基硫酸钠的简称，它是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而使其电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量。

优缺点：实验成本较低，仪器设备也相对很简单，一套电泳装置即可。但是精确程度相对较低，好的电泳图谱需要一定的技术。 

 

基质辅助激光解吸电离质谱技术（MALDI-MS）是将待测物悬浮或溶解在一个基体中，基体与待测物形成混晶，当基体吸收激光的能量后，均匀传递给待测物，使待测物瞬间气化并离子化。基体的作用在于保护待测物不会因过强的激光能量导致化合物被破坏。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，检测离子。

优缺点：（1）同ESI-MS 一样对样品的消耗很少；（2）随着质量分析器的不断改进、新的基质的不断发现和应用以及延迟萃取技术的使用，使得MALDI-MS 的最高分辨率不断提高，甚至超过ESI-MS；（3）MALDI-MS 单电荷峰占主要部分，碎片峰少，非常有利于对复杂混合物的分析，且能忍受较高浓度的盐、缓冲剂和其他难挥发成分，降低了对样品预处理的要求；（4）MALDI-TOF 质谱对生物大分子分子量的测定范围是所有测试技术中最广的。

 

 

服务说明

需要您提供：

1. 蛋白大概分子量信息。

2. SDS-page需要使用的marker信息。

测试周期：收到样品1周左右时间出数据.

测试设备：凝胶电泳仪，MALDI-TOF 质谱仪

 

酶联免疫吸附(ELISA)测试

内容简介

ELISA介绍

ELISA实验是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

在这种测定方法中有3种必要的试剂：1.固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）2.酶标记的抗原或抗体（标记物）3.酶作用的底物（显色剂）

测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

 

测试过程（以试剂盒为例）

1.    加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.    温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

3.    配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备。

4.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

5.    加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

6.    显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟。

7.    终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.    测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

结果展示

提供：原始数据；简单数据处理和绘图；

 

服务说明

样品准备要求：

1.所检测蛋白测试的试剂盒（也可以由公司代购）；

2.所检测的样品；

 

服务简介

ELISA检测是免疫检测中的一项重要技术，该法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及可自动化操作等特点。目前已广泛应用于临床检测及研究领域。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。ELISA方法也合适用于经mRNA表达谱芯片、蛋白芯片或蛋白质组学（质谱）等实验找出差异蛋白后，进一步验证差异蛋白。

 

检测项目

提供间接法ELISA检测、夹心法ELISA测定和竞争法ELISA测定，以及ELISA试剂盒订购，组织样本匀浆。

间接法ELISA检测：

用特异性抗原包被固相载体，加入待测的抗体样品反应后，再加入酶标二抗，经底物显色后测定。

夹心法ELISA检测：

用第一抗原或抗体包被固相载体，加入待测的抗体或抗原反应后，再加入酶标的第二抗原或抗体，经底物显色后测定，即可计算出待测抗原的量。此方法所用抗原一般为大分子抗原，如蛋白等，不适用于多肽等半抗原。

竞争法ELISA检测：

用特异性抗体包被固相载体，同时加入酶标抗原和待测抗原的混合物样本，待测抗原将与酶标抗原竞争与固相上抗体结合。经底物显色后测定，计算两组数值之差即可推出待测抗原的量。此方法常用于测定小分子抗原。

 

样品要求

1. 客户提供含待测样品的标本（血清、血浆等），我们根据客户的需要（定性、定量）制定技术服务路线。
2. 需提供待检测抗体和包被用抗原。
3. 检测的样本为细胞培养上清、人和动物的血清、血浆时，样本收集后应立即-20度保存，若长期保存应-80度保存。
4. 样本量的要求：若一个指标做复孔检测应不少于250ul，做单孔检测应不少于120ul。建议若客户样本量充足最好提供500ul以上。
5. 客户的样本收集后，立即按要求保存，切忌反复冻融。外地客户邮寄需要用干冰运输，邮寄前请与技术支持沟通确认。